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實驗時elisa競爭法檢測抗-HBe(快速法)

發布時間:2019-12-12瀏覽次數:3361返回列表

實驗原理

用抗-HBe包被固相載體后,同時加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg,若被檢血清中含有抗-HBe,則與包被抗-HBe競爭結合HBeAg,被檢標本中抗-HBe越多,HBeAg被結合越多,而與包被抗-HBe結合就越少,加底物后顯色就越淺;反之越深。

主要試劑與器材

elisa試劑盒:內含已包被抗-HBe板條、HRP-HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液、陽性和陰性對照血清,底物溶液(A液、B液)、終止液、洗滌液。

結果分析

P/N0.3為陽性。P/N0.3為陰性。

P/N=待檢血清OD/陰性對照OD值。

注意事項

1、試劑置2-4℃保存。取用時應先置室溫平衡。干包被板條須密封防潮,zui好凍存,取用后余者及時封存。

2、恰當選好HBeAg的濃度。

3、試劑用前應搖勻。

操作步驟

1、加樣:取出干包板條,按編號順序分別加50μl待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清于相應孔中。設空白對照孔,除此孔外,每孔加HBeAg50μl、HRP-HBe50μl,振蕩混勻后,置43℃(或37℃)溫育1h。

2、洗滌:甩去孔內液體,用洗滌液注滿各孔,靜置20s,甩干。如此重復洗滌4次,在吸水紙上拍干。

3、顯色:每孔加顯色劑A、顯色劑B50μl,振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min。

4、終止:每孔加終止液50μl,振蕩混勻。

5、酶標儀檢測:選用450nm波長,用空白孔調零之后測各孔OD值。

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